液相色譜法測定維生素A、維生素D3（VA和VD3）

維生素A（VA）、維生素D3（VD3）、維生素E（VE）和β-胡蘿卜素是維持人體正常生理活動和機能的脂溶性維生素，缺乏這些維生素會導致多種疾病。流行病學研究資料表明，脂溶性維生素與癌癥發生有著相應的關系

  食道癌是世界八大癌癥之一，而我國又是食管癌的高發地區，每年因食管癌死亡者約15萬人，但有關食道癌與脂溶性維生素的關系尚無相關報道。通過測定和比較食道癌病人和正常人血清中脂溶性維生素的含量，可以了解食道癌與脂溶性維生素的關系，為指導病人正確地補充維生素

提供實驗室依據。目前我國尚無測定血清中脂溶性維生素的標準方法。

HPLC因其具有高分離效能、靈敏快速、可自動化等優點，已經廣泛用于食品等樣品中脂溶性維生素的測定，而同時測定人血清中VA、VD3、VE和β-胡蘿卜素四種脂溶性維生素的報道甚少。因此，本課題組擬建立HPLC同時測定VA、VD3、VE和β-胡蘿卜素的方法，并應用于食道癌病人和正常人血清樣品的測定，為研究食道癌的發生與血清中脂溶性維生素之間的關系提供簡單可行的實驗技術和數據。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑液相色譜儀附紫外檢測器、吹氮儀、視黃醇、維生素D3、α-生育酚和β-胡蘿卜素標準品  1mg/ml

維生素標準貯備液配制：分別精密稱取視黃醇、VD3、α-生育酚、β-胡蘿卜素各0.025g于25ml容量瓶中，視黃醇、VD3和α-生育酚用甲醇，β-胡蘿卜素用二氯甲烷溶解并定容到刻度，搖勻備用。

1.2 

實驗方法

1.2.1 

色譜條件   色譜柱：C18柱；柱溫25℃；流動相：甲醇:二氯甲烷:乙腈（10:20:70）；流動相程序：

0~12min  流速1.0~1.5ml/min  線性變化，12min~17min  保持流速 1.5ml/min，17min

流速回到1.0ml/min；檢測 波長切換程序：0~6min為324nm，6min~8 min為263nm，8~12min為291nm，12min后為462nm; 1.2.2 標準曲線的繪制分別取適量維生素標準溶液，用流動相稀釋成濃度不同的標準系列，10μl進樣測定，以維生素標準溶液濃度為橫坐標，相應的峰面積為縱坐標繪制標準曲線或進行線性回歸。

1.2.3 樣品測定0.2ml血清中加入0.2ml無水乙醇沉淀蛋白質，0.8ml已醚/石油醚混合溶液提取，振搖1min后15000r/min離心2min；取上清液0.6ml，氮氣吹干，0.10ml流動相溶解殘渣，漩渦振蕩器振蕩30s，15000r/min離心2min，取25μl上清液進樣測定。標準和樣品色譜圖如圖1